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                    葉酸測定中樣品的收集,處理及保存的方法

                    更新時間:2019-03-13  |  點(diǎn)擊率:1628
                         葉酸測定中樣品的收集,處理及保存的方法
                      葉酸測定試劑盒試驗原理
                      葉酸測定試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。
                      葉酸測定試劑盒樣品收集,處理及保存方法:
                      1、血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
                      2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
                      3、細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
                      4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
                      5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
                      葉酸測定試劑盒怎么用的實驗操作步驟如下:
                      1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
                      2、加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
                      3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
                      4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
                      5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
                      6、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
                      7、溫育:操作同3。
                      8、洗滌:操作同5。
                      9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
                      10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
                      11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
                      以上便是今天關(guān)于葉酸測定中樣品的收集,處理及保存的方法的全部分享了,希望對大家今后使用本設(shè)備能有幫助。
                      
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