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                    檢測水中大腸埃希氏菌O157:H7的HiMedia顯色培養(yǎng)基

                    更新時間:2019-10-21  |  點擊率:1104

                    現(xiàn)在,市面上能見到的顯色培養(yǎng)基大多用于食品和臨床,但HiMedia廠家生產的顯色培養(yǎng)基覆蓋面廣,能用于供水行業(yè)和環(huán)境監(jiān)測站。下面為您介紹一下。

                     

                    顯色培養(yǎng)基的評價常有多個指標,如靈敏度,特異性等,它們也與所檢測的樣本類型有關。生產廠家經常不提供這些指標。但一些第三方檢測中心或研究機構對此則有相關研究,并發(fā)表在專業(yè)期刊上。

                     

                    2011年,《學術研究期刊》發(fā)表了一篇對顯色培養(yǎng)基的比較研究。作者來自埃及國家研究中心水污染研究部,他們通過用顯色培養(yǎng)基檢測了水中的大腸埃希氏菌O157:H7,對顯色培養(yǎng)基進行了評價(見參考文獻1)。

                     

                    作者指出,在水中,E. coli O157:H7可以極低水平存在,伴隨大量競爭菌群。傳統(tǒng)方法需要超過48小時完成培養(yǎng),同時還需進一步的生化鑒定和血清學鑒定。依據原理主要是SMAC平板,在麥康凱瓊脂基礎上用山梨醇替代乳糖,E. coli O157:H7不能發(fā)酵山梨醇。該方法存在一定的偏差,因為有些E. coli O157:H7菌株可以發(fā)酵山梨醇。

                     

                    顯色培養(yǎng)基的出現(xiàn)可改善這一檢測方法。研究者采用HiMedia公司生產的HiCrome EC O157:H7 Selective agar。因為存在特異性顯色底物,E. coli O157:H7菌落呈現(xiàn)深紫色,E. coli菌落則呈現(xiàn)淡粉色至淡紫色。

                     

                    研究者收集了尼羅河地表水的60個水樣本。收集水平遵照了200年APHA發(fā)布的指南。所有水樣均收集在無菌的1L玻璃瓶中(Simax品牌,捷克共和國產),并在4℃條件下運輸到實驗室。所有樣品在收集后6小時內進行細菌學檢查。

                     

                    研究用的E. coli O157:H7標準菌株編號為ATCC 43895。研究者除采用了HiMedia出的HiCrome EC O157:H7 Selective agar(簡稱HEC)外,還采用了美國Biolog 產的Rainbow agar O157(簡稱RB)。該平板為無色,在上面E. coli菌落呈現(xiàn)紅紫藍黑等不同顏色,E. coli O157:H7呈現(xiàn)深灰色至深黑色。而其他葡萄糖醛酸酶陽性菌株呈現(xiàn)紅色或洋紅色菌落。該培養(yǎng)基添加有新生霉素和亞碲酸鹽。

                     

                    研究遵循了2005年APHA指南,采用薄膜過濾法對E. coli O157:H7進行了檢測和計數。濾膜放置在培養(yǎng)基上,37℃倒置孵育24小時。對典型菌落計數,單位為CFU/100 ml。菌落的進一步確證采用PCR法。終計算得出靈敏度(真陽性率)、特異性(真陰性率)、總有效率(即(真陽性+真陰性)×100/總數),并進行統(tǒng)計學分析(t檢驗)。

                     

                    結果見表1、表2、表3和表4。

                     

                    表1. 在不同培養(yǎng)基上,E. coli O157:H7標準菌株的菌落特征

                    菌株

                    培養(yǎng)基

                    陽性菌落

                    正確數 (%)

                    假陰性菌落

                    假陰性數(%)

                    E. coli O157:H7

                    HEC

                    深紫/紫紅

                    30 (93.8)

                    淡粉/淡紫

                    2(6.2)

                    RB

                    灰/黑

                    30 (93.8)

                    不同顏色(如紅紫藍)

                    2(6.2)

                     

                    表2. 非E. coli O157:H7菌株在不同培養(yǎng)基上的菌落情況

                    菌株

                    培養(yǎng)基

                    真陰性結果 (%)

                    假陽性結果(%)

                    E. coli O157:H7

                    HEC

                    10 (100)

                    0(0.0)

                    RB

                    9 (90.0)

                    1(10.0)

                     

                    表3. 培養(yǎng)基分離標準菌株的有效性

                     

                    HEC

                    RB

                    PCR

                    真陽

                    30

                    30

                    30

                    真陰

                    10

                    9

                    9

                    假陽

                    0

                    1

                    1

                    假陰

                    2

                    2

                    1

                    靈敏度

                    93.7%

                    93.7%

                    96.7%

                    特異度

                    100%

                    90%

                    90%

                    有效率

                    95.2%

                    92.8%

                    95.1%

                     

                    表4. 60個尼羅河水樣在不同培養(yǎng)基上E. coli O157:H7的假陽性率

                     

                    分離株數量

                    假陽性數(%)

                    HEC

                    80

                    5(6.25)

                    RB

                    80

                    8(10.0)

                     

                    可見,HiCrome EC O157:H7 Selective agar分離E. coli O157:H7具有更高的靈敏度和特異度,并已被PCR進一步確證。顯色培養(yǎng)基不失為一種靈敏、快速、特異的方法,并且無須任何確證試驗。

                     

                    HiMedia公司是微生物產品生產商,具有40多年生產研發(fā)經驗,具有WHO-GMP認證、ISO9001,ISO13485質量體系認證和CE、FDA注冊登記。產品已行銷世界上140多個國家。

                     

                    締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測領域,一如既往地為您帶來的服務。

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